凝膠滲透色譜(GPC),又稱尺寸排除色譜(SEC),是一種使用特殊的色譜柱、按照尺寸大小分離天然與合成高分子、生物高分子的色譜技術。
GPC 色譜的操作原理是利用分子的流體力學半徑(Rh)或流體力學體積(Vh)進行分離,而非利用分子量的差異。分離過程在GPC色譜柱中進行,其柱填充物通常是聚苯乙烯凝膠、玻璃粉或硅膠等多孔物質。由于分子大小的差異,較大的分子無法進入凝膠的空隙,能更快的從色譜柱中被洗脫。
凝膠滲透色譜過程始于單相色譜泵,它推動流動相持續(xù)流過系統(tǒng)管路。系統(tǒng)內置脫氣機則會去除管路以及溶劑中氣體,以提高信號穩(wěn)定性,降低噪音。進樣方式可以是人工進樣或自動進樣。樣品溶液隨即被導入GPC色譜柱,開始尺寸分離過程。當樣品從色譜柱被洗脫后,它將被一個或多個檢測器進行檢測,其結果最終被電腦的數據處理系統(tǒng)進行分析。
GPC色譜的分析程度取決于系統(tǒng)檢測器的種類與數量。通過選定不同的檢測器,按照不同的校準方法可以計算出分子量(MW)、分子量分布(MWD)、特性粘度(IV)、分子密度、水力半徑(Rh)與回轉半徑(Rg)等參數。同時,也可能獲得諸如構造、聚集度、支化等大分子結構以及共聚物組成等額外信息。
根據檢測系統(tǒng)(檢測器的數量及類型)的不同,常見有以下兩種實驗方法:
傳統(tǒng)校準法
三檢測聯(lián)用法(包含了光散射檢測器)
其中,傳統(tǒng)檢測法運用濃度檢測器和已校準的GPC柱,能夠測量相對分子量和聚合度多分散性。而光散射檢測器和濃度檢測器聯(lián)用,能夠提供絕對分子量、分子尺寸大小、特性粘度以及分子構成、聚集與支化的信息。